牛奶中氯霉素檢測的固相萃取方法

（SuperClean C18）

一、實驗目的

本研究利用固相萃取作為樣品前處理方法，HPLC 作為分析方法，檢測牛奶樣品中的氯霉素殘留水平。該方法操作簡便，可簡化樣品前處理過程，減少有機溶劑的使用。

二、實驗目標物

氯霉素(CAS:56-75-7)

三、應用范圍

本方法適用于動物源性食品中氯霉素的檢測的 HPLC 檢測及確證。

四、參考標準

《GB/T 22338-2008 動物源食品中氯霉素類藥物殘留量測定》

五、實驗材料

NuAnalytical SuperClean C18 固相萃取柱 500mg/6mL。

六、實驗方法

1、 樣品待測溶液制備

準確稱取牛奶 5 g(精確到 0.001 g)，加入乙酸乙酯 15 mL，渦旋振蕩 1 min，搖床振蕩10 min。3000 r/min 轉(zhuǎn)速離心 10 min。將上清液轉(zhuǎn)移至試管中，于 45  ℃氮吹吹干，用 5 mL乙腈-水溶液(5:95, v/v)溶解，待凈化。

2、活化

依次用 5  mL 甲醇和 5  mL 水活化。

3、上樣和洗脫

將待凈化液加入已活化好的固相萃取柱中，以 1  mL/min 的流速過柱，棄去濾液。用 2×4 mL 乙腈-水溶液(5:95, v/v)淋洗固相萃取柱，棄去淋洗液，抽干 10 min。用 8 mL 乙酸乙酯洗脫固相萃取柱，收集洗脫液。

4、重新溶解

洗脫液于 45 ℃氮氣吹干，用 1 mL 乙腈-水溶液(2:8, v/v)定溶，0.22 μm 微孔濾膜過濾， 供 HPLC 測定。

5、HPLC 條件

色譜柱：SuperLu C18 (250×4.6mm，5μm)

檢測器：UV@268 nm

流動相：A:水      B:甲醇

洗脫方式：等度洗脫，A:B=40 : 60

柱溫：室溫    

 流速：1.0 mL/min            

進樣量：20μL

七、實驗結(jié)果

1、牛奶基質(zhì)中氯霉素的 0.5mg/kg 添加回收結(jié)果

名稱   1   2   3 平均回收率（%） RSD（%） 氯霉素 97.1 99.7 100.2 99 1.68 表 1 牛奶基質(zhì)中氯霉素的 0.5mg/kg 添加回收結(jié)果回收率（%）

 

 2、添加水平為 0.5mg/kg 牛奶基質(zhì)中氯霉素檢測色譜圖

圖 1    添加水平為 0.5mg/kg 牛奶基質(zhì)中氯霉素檢測色譜圖