2025版中國(guó)藥典通則的0512高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）相較于之前的版本有了顯著的優(yōu)化與補(bǔ)充。以下是對(duì)該方法的詳細(xì)解析：
### 一、方法概述
HPLC是采用高壓輸液泵將規(guī)定的流動(dòng)相泵入裝有填充劑的色譜柱，對(duì)供試品進(jìn)行分離測(cè)定的色譜方法。注入的供試品由流動(dòng)相帶入色譜柱內(nèi)，各組分在柱內(nèi)被分離，并進(jìn)入檢測(cè)器檢測(cè)，由積分儀或數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)記錄和處理色譜信號(hào)。
### 二、主要修訂內(nèi)容
1. **儀器參數(shù)優(yōu)化**：
* 新增了超高效液相色譜（UHPLC）相關(guān)技術(shù)要求，明確要求使用亞二微米填料色譜柱時(shí)需配備耐高壓輸液泵與低擴(kuò)散檢測(cè)池。
* 流動(dòng)相比例允許誤差由原±3%調(diào)整為±2%，梯度洗脫程序精度需滿足保留時(shí)間偏差不超過(guò)±0.1分鐘。
* 檢測(cè)器參數(shù)中，二極管陣列檢測(cè)器的波長(zhǎng)準(zhǔn)確性由±2nm提高至±1nm，漂移值標(biāo)準(zhǔn)從0.001AU/h收緊為0.0005AU/h。
* 新增對(duì)蒸發(fā)光散射檢測(cè)器氣體壓力波動(dòng)范圍的限定，要求氮?dú)鈮毫Σ▌?dòng)不超過(guò)±5%。
2. **系統(tǒng)適用性提升**：
* 理論板數(shù)要求根據(jù)不同色譜柱類(lèi)型進(jìn)行差異化設(shè)定：常規(guī)柱（5μm）需≥5000，亞二微米柱需≥15000。
* 分離度標(biāo)準(zhǔn)由≥1.5調(diào)整為≥2.0，特別規(guī)定手性分離時(shí)需≥2.5。
* 拖尾因子判定引入動(dòng)態(tài)調(diào)整機(jī)制，主峰對(duì)稱(chēng)因子在0.8-1.5范圍內(nèi)需結(jié)合峰容量綜合評(píng)估。
* 新增柱效保持性驗(yàn)證，要求連續(xù)進(jìn)樣6針后理論板數(shù)下降不超過(guò)15%。
3. **方法驗(yàn)證強(qiáng)化**：
* 專(zhuān)屬性驗(yàn)證需提供至少三種不同機(jī)理色譜條件的對(duì)比數(shù)據(jù)。
* 定量限確定改用信噪比法替代原視覺(jué)評(píng)估法，要求S/N≥10。
* 耐用性試驗(yàn)參數(shù)范圍擴(kuò)大，柱溫波動(dòng)范圍由±5℃擴(kuò)展至±10℃，流動(dòng)相pH允許偏差±0.2單位。
* 新增色譜柱批次間差異驗(yàn)證，要求不同批號(hào)色譜柱的理論板數(shù)差異不超過(guò)20%。
4. **數(shù)據(jù)完整性控制**：
* 引入審計(jì)追蹤強(qiáng)制開(kāi)啟要求，原始數(shù)據(jù)存儲(chǔ)格式新增mzML、ANDI等開(kāi)放格式。
* 積分參數(shù)修改記錄保留期限由3年延長(zhǎng)至藥品有效期后5年。
* 系統(tǒng)適用性失敗時(shí)的數(shù)據(jù)處置流程細(xì)化，規(guī)定需執(zhí)行偏差調(diào)查并留存完整的調(diào)查記錄。
* 新增電子簽名雙因子認(rèn)證要求，操作者身份識(shí)別需采用生物特征與動(dòng)態(tài)口令組合認(rèn)證。
5. **環(huán)保要求明確**：
* 明確禁止使用含鈹元素的流通池。
* 流動(dòng)相中含乙腈比例超過(guò)60%的檢測(cè)方法需配套蒸餾回收裝置。
* 毒性溶劑使用實(shí)行分級(jí)管理，涉及苯、四氯化碳等Ⅰ類(lèi)溶劑的方法需單獨(dú)備案。
* 廢液處理?xiàng)l款增加pH中和預(yù)處理要求，有機(jī)廢液與無(wú)機(jī)廢液必須分類(lèi)收集。
* 實(shí)驗(yàn)室需配備實(shí)時(shí)溶劑泄漏監(jiān)測(cè)系統(tǒng)，丙酮年使用量超過(guò)500L的機(jī)構(gòu)需安裝廢氣催化燃燒裝置。
6. **應(yīng)用范圍擴(kuò)展**：
* 增加了對(duì)部分新藥和生物類(lèi)似藥的HPLC分析方法，以適應(yīng)新藥開(kāi)發(fā)的需求。例如，新增了多個(gè)針對(duì)生物技術(shù)產(chǎn)品（如利妥昔單抗）的HPLC分析方法，尤其是單克隆抗體藥物和重組蛋白類(lèi)藥物。
* 對(duì)于中藥領(lǐng)域，特別是包含了多組分的分析方法，這些方法能同時(shí)分析多種活性成分，有助于控制中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量。
### 三、實(shí)施過(guò)渡期安排
* 現(xiàn)有品種方法轉(zhuǎn)移需在2026年6月30日前完成系統(tǒng)適用性復(fù)核。
* 新建方法自2025年12月1日起強(qiáng)制執(zhí)行新標(biāo)準(zhǔn)。
### 四、其他注意事項(xiàng)
* 藥典委員會(huì)將建立色譜柱等效性數(shù)據(jù)庫(kù)，企業(yè)可提交數(shù)據(jù)申請(qǐng)?zhí)囟ㄆ放粕V柱的等效性認(rèn)定。
* 對(duì)于因設(shè)備限制無(wú)法達(dá)到新參數(shù)要求的基層檢測(cè)機(jī)構(gòu)，允許申請(qǐng)為期兩年的過(guò)渡期豁免，但需每季度提交數(shù)據(jù)比對(duì)報(bào)告。
綜上所述，2025版中國(guó)藥典通則的0512高效液相色譜法在儀器參數(shù)、系統(tǒng)適用性、方法驗(yàn)證、數(shù)據(jù)完整性、環(huán)保要求以及應(yīng)用范圍等方面均進(jìn)行了全面優(yōu)化與擴(kuò)展，旨在提高檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性、重現(xiàn)性與可操作性，適應(yīng)新型藥物研發(fā)與復(fù)雜基質(zhì)分析的挑戰(zhàn)。
